Conventionele kolomchromatografie
2. Chromatografische kolom (rotatietype)
3. Chromatografische kolom (handleiding)
*** Prijslijst voor geheel hierboven, informeer ons om te krijgen
Beschrijving
Technische Parameters
Conventionele kolomchromatografieGebruikt het verschil in distributieverhoudingen van verschillende stoffen tussen de stationaire fase en de mobiele fase, of de verschillende retentiecapaciteiten van vaste fasen ten opzichte van verschillende stoffen, om stofscheiding te bereiken. Wanneer het mengsel door de chromatografische kolom met de mobiele fase stroomt, interageert het met de stationaire fase in de kolom (zoals oplossing, adsorptie, enz.). Vanwege de verschillen in fysische en chemische eigenschappen en structuren van elke component in het mengsel, variëren de grootte en sterkte van hun interacties met de stationaire fase ook. Onder dezelfde drijvende kracht is de retentietijd van elke component in de stationaire fase anders, zodat de componenten in het mengsel in een bepaalde volgorde uit de kolom stromen, waardoor scheiding wordt bereikt.
Parameter
Detectie van pesticidenresten
 |
 |
 |
 |
Dat zeggen we vaakConventionele kolomchromatografieis eigenlijk kolomchromatografie -scheiding, ook bekend als kolomchromatografie. Het werd voor het eerst uitgevonden en gebruikt door Russische wetenschappers in 1903. Het verpletterde een oplossing van plantenpigmenten in calciumcarbonaatpoeder en vond verschillende kleurenbanden op het calciumcarbonaatpoeder van boven naar beneden. Door verschillende kleurenbanden te scheiden en te extraheren, werden relatief pure chlorofyl, luteïne, enz. Verkregen.
Na honderd jaar ontwikkeling is deze methode relatief volwassen geworden en is de stationaire fase ook geëvolueerd van een enkel calciumcarbonaatpoeder naar aluminiumoxide (die kan worden verdeeld in zure, neutraal, alkalisch), silicagel, geactiveerde koolstof, enz. Onder hen is de meest gebruikte in grote laboratoria, in het algemeen verbonden in de normale fase silicasilicagel!
De stationaire fase (silicagel) moet in het algemeen worden gezuiverd en geactiveerd en de deeltjesgrootte moet uniform zijn. In theorie, hoe kleiner de deeltjesgrootte en hoe groter het oppervlak per massa -eenheidsmassa, hoe hoger de adsorptiecapaciteit en hoe beter het scheidingseffect.
Bij praktisch gebruik, wanneer de vaste fasedeeltjes te klein zijn, zijn er echter vaak twee situaties: een daarvan is dat ze lichter van gewicht zijn en gemakkelijk in de lucht drijven (silicagel kan niet worden afgebroken door het menselijk lichaam en hoe fijner, hoe giftiger het is); Ten tweede kunnen kleine deeltjes ook leiden tot kleine openingen tussen deeltjes, wat resulteert in een langzaam oplosmiddeldebiet en tijdverbruik; Siliconen als voorbeeld nemen, is de grootste commercieel gebruikte siliconengrootte momenteel 200-300 mesh.
In termen van het passeren van kolommen, naast de automatische analyse -apparatuur zoals voorwaartse circulatiebereiding, efficiënte vloeistoffase -voorbereiding en eerder genoemde kolom passerende machines, is de handmatige doorgang van de kolom voornamelijk onderverdeeld in drie typen: het passeren van de atmosferische druk, de drukkolom van de druk en het passeren van drukkolom.
Onder hen resulteert de depressurisatie door de kolom in slechte adsorptie -efficiëntie als gevolg van de snelle stroomsnelheid van het eluent, wat leidt tot het verlies van het grootste deel van het aantal laden en slechte scheidingsefficiëntie. Het is geschikt voor het scheiden van monsters met relatief open TLC -platen, vooral voor monsters met slechts één grote polaire onzuiverheid in het product; Het grootste deel van zijn tijd wordt besteed aan de voorbehandeling van verbindingen, waardoor sommige onzuiverheden worden verwijderd voordat ze zorgvuldige zuivering zijn. Opgemerkt moet worden dat oplosmiddelverdamping veroorzaakt door negatieve druk tijdens gebruik kan leiden tot de condensatie van een groot aantal waterdruppeltjes op het buitenoppervlak van de kolom. Watergevoelige verbindingen moeten niet gemakkelijk worden geprobeerd.
Atmosferische drukkolom passeren is de meest effectieve scheidingsmethode tussen de drie, maar omdat het oplosmiddel vaak te langzaam beweegt, kan zelfs het beste scheidingseffect de efficiëntie beïnvloeden. Daarom wordt op dit moment meestal druk uitgeoefend, die door de onder druk staande kolom wordt doorgegeven; Maar de druk moet niet te hoog zijn. Over het algemeen wordt een dubbele kettingbal gebruikt voor handmatige werking en wordt een vispomp gebruikt voor automatische werking. Beide kunnen worden gewijzigd zoals weergegeven in de afbeelding.
Conventionele kolomover kruisingsproces:
Voorbereidingswerk moet goed worden gedaan:
Bekijk bij het selecteren van een kolom of er een schuurbord is. Voor kolommen zonder schuurborden, vergeet niet om de bodem te vullen met wat katoen. Het katoen moet niet te dik of te dun zijn, zolang het de siliconen kan blokkeren om eraf te komen. (De blogger ontmantelde direct een kledinghanger en gebruikte deze om katoen in de uitlaat op de stekker te steken)
Bereid de minimale polariteit eluent, UV -lamp (aanbevolen voor laboratoriumpersoneel, handheld, klaar om op elk gewenst moment een foto te maken), drukapparatuur en testbuisrek indien nodig!
Selecteer een geschikte kolom, voeg siliconengel toe, geniet van de siliconengel en vloeit deze af
De selectie vanconventionele kolomchromatografieis erg belangrijk, en hun grootte moet worden berekend op basis van de hoeveelheid product, die in het algemeen kan worden verdeeld in:
Een paar milligram kolom (de uiteindelijke keuze voor totale synthese);
Een kolom van enkele tientallen milligram (methodologisch expansiesubstraat);
500 milligram tot 1 gram kolom (met behulp van methodologie als grondstof);
Pilaren rond 5G en grotere schalen.
De meest voorkomende verhouding van kolomdiameter tot hoogte in het laboratorium ligt in het algemeen tussen 1: 2.5 en 1:15. De hoeveelheid silicagel die wordt gebruikt als een stationaire fase tijdens het laden van monsters is ongeveer 20 tot 40 keer die van het monster. De standaard voor het selecteren van kolommen moet gebaseerd zijn op de TLC -plaatklimsituatie van uw monster. Als er veel onzuiverheden in de nabijheid zijn, probeer dan zoveel mogelijk een grotere kolom te kiezen, zodat uw monster kan worden bedekt met een kleine dunne laag (aanbevolen dikte onder 5 mm). Als de onzuiverheden ver weg zijn, kan deze dikte natuurlijk worden verhoogd, maar het wordt niet aanbevolen dat de dikte van uw monster de 2 cm overschrijdt, tenzij het product eenvoudig wordt gewassen.
Veel mensen maken een fout om te denken dat het toevoegen van meer siliconen, zelfs als het dikker op mijn monster is, kan het goed worden gescheiden? Dit antwoord is negatief!
De reden is dat deze mensen nooit hadden gedacht dat de monsters onder en boven niet op dezelfde lijn liepen, dus ze konden slechts enkele zuivere verkrijgen, waarvan de meeste werden gekruist, om nog maar te zwijgen van onzuivere, tijd en oplosmiddelen verspillen!
Daarom vereist het monster ook dunner worden!
Na het selecteren van de kolom kan het toevoegen van siliconen worden gedaan via een voedingsrechter. Zorg er tegelijkertijd voor dat je een masker draagt en in een rookkap werkt. De reden hiervoor zal niet worden uitgewerkt door de blogger (silicose).
Wat betreft de infiltratie van silicagel, het aanbevolen proces is: Plaats eerst de silicagelkolom met de silicagel verticaal geïnstalleerd, het oppervlak van de silicagel plat plat met uw hand, verbind de bodem van de silicagelkolom op een waterpomp, pomp de silicagel uit en giet vervolgens de silicagel uit de silicagel en giet vervolgens de minste polaire eure van bovenaf. Wanneer het eluent op het punt staat te lekken, sluit u de afsluitklep om te voorkomen dat oplosmiddel in de waterpomp wordt gepompt.
Vervolgens kan onder druk de siliconengel uniform worden geweekt door zeven of acht kolomvolumes te spoelen met de kleinste hoeveelheid ontwikkelende agent.
Monster hierboven
Bemonstering is verdeeld in natte bemonstering en droge bemonstering.
(1) Natte bemonstering.
De aanbevolen methode is om een pipet te gebruiken met een rubberen punt om het monster te zuigen, dicht bij het bovenste gedeelte van de siliconengel, langzaam en gelijkmatig druppelen tot het monster totdat deze een laag bedekt, vervolgens met het toevoegen van het monster en wat druk uit te oefenen om de olieachtige substantie in de siliconengellaag op te dompelen; Dompel de olieachtige substantie in de siliconenlaag en herhaal dit proces meerdere keren totdat alle monsters zijn geladen!
Sommige nieuwe studenten kunnen nieuwsgierig zijn waarom deze operatie wordt uitgevoerd in plaats van de natte procesolie in één keer te coaten?
In feite kan deze bewerking de effectieve hoogte van de monsterlaag verminderen. Op dit punt is al kolomchromatografie begonnen en de volgende monsters zijn als oplosmiddelen die de vorige monsters naar adsorb en desorb in silicagel duwen.
(2) Wat betreft droge bemonstering.
Tenzij absoluut noodzakelijk, wordt het niet aanbevolen. Vaste monsters worden meer aanbevolen om te worden geslagen of gekristalliseerd. "Gewetenloze methoden, ethylacetaat versus water, ultrasone oscillatieondersteunde kristallisatie van hoge kokende olie" en "het delen van een laboratorium -herkristallisatiemethode" worden aanbevolen.
Droge bemonstering brengt over het algemeen twee problemen met zich mee; Enerzijds neemt de mogelijkheid van reactie tussen het monster en silicagel tijdens het monstermengproces toe vanwege de noodzaak om de temperatuur te verhogen voor roterende verdamping; Aan de andere kant betekent droge belasting dat adsorbentia in de monsterlaag worden geïntroduceerd, waardoor de hoogte van de monsterlaag of de grootte van de kolom wordt verhoogd, waarvoor meer tijd en meer oplosmiddel nodig is.
Als er geen andere keuze is, giet u het geadsorbeerde poeder eenvoudig langzaam in de kolom om te laden, met enkele vereisten vergelijkbaar met natte methoden.
Voeg watervrij natriumsulfaat of kwartszand toe
Om te voorkomen dat de monsterlaag wordt beïnvloed tijdens de toevoeging van eluent, waardoor ongelijkheden, vervorming en het beïnvloeden van de scheidingsefficiëntie een laag watervrij natriumsulfaat of kwartszand in het algemeen bovenop de monsterlaag worden veroorzaakt.
Onze ingenieurs geven er persoonlijk de voorkeur aan om watervrij natriumsulfaat te leggen omdat het ook een droogfunctie heeft en vriendelijk is voor oplosmiddelen zoals dichloormethaan, die vatbaar zijn voor vervluchtiging, warmteabsorptie en condensatie!
Gradiënt elutie, bemonstering en verzameling
Spoel na het laden eerst de kolom met een klein polair oplosmiddel (een oplosmiddel waarmee het product niet kan passeren) voor 2-3 kolomvolumes (één kolomvolume wordt gedefinieerd als het volume van de mobiele fase die in en uit stroomt) om uniformiteit te garanderen en vervolgens een verhouding voor elution te selecteren.
Hoe kies je het eluent dat door de kolom gaat?
De verhouding van eluent is de verhouding wanneer uw product een RF -waarde bereikt van ongeveer 0. 2 op de TLC -plaat
Dit is de ervaring van het wassen van kolommen die ik veel boeken heb gelezen en gedeeld, en het eigenlijke proces is ook erg vergelijkbaar. Persoonlijk geef ik er de voorkeur aan om de gradiënt met twee keer te verminderen.
Als het oplosmiddel voor TLC -plaat klimmen bijvoorbeeld PE/EA =2: 1 is, is de blogger meer kans om gradiëntelutie te starten van PE/EA =4: 1 en eindigt op PE/EA =2: 1, in het algemeen resulterend in betere resultaten.
Er zijn ook technieken bij het verzamelen van eluent. U kunt eerst een grotere testbuis kiezen om deze te ontvangen, en wanneer TLC het doelpunt nadert, schakelt u over naar een kleinere testbuis. Dit kan de mogelijkheid verminderen om meer te ontvangen en onzuiverheden te voorkomen.
Als u situaties tegenkomt waarin onzuiverheidspunten en productpunten dicht bij elkaar zijn, vooral die met zwakke fluorescentie, vergeet dan niet om geen druk uit te oefenen. Kies in plaats daarvan om de kolom onder normale druk door te geven en de buis te wijzigen elke keer dat een half of minder buizen zijn verbonden, wat ook de zuiveringskans kan vergroten.
Vergeet niet om de pilaar niet tijdig af te handelen!
Veel mensen hebben de gewoonte aan te nemen dat de kolom is doorgegeven en gedroogd wanneer er in de latere fase geen product in een of twee buizen is na TLC.
Ik realiseerde me alleen dat de opbrengst te laag was toen ik deze berekende, of toen ik een spectrum ging maken, ontdekte ik dat het spectrum onjuist was en het verkeerde punt miste. Ik heb er diep spijt van gehad.
Het wordt dus aanbevolen dat u zich niet haast om de kolom te verwerken na het voltooien van het gewenste punt. Voer in plaats daarvan nucleaire magnetische resonantie uit om overeen te komen met de opbrengst vóór de verwerking.
Als u het druk hebt of haast hebt om andere verbindingen hiermee te zuiverenconventionele kolomchromatografie, het wordt aanbevolen om te spoelen met een goedaardig goedaardig gemengd oplosmiddel met hoge polariteit en dit deel van de eluent afzonderlijk te laten voor identificatieresultaten.
Populaire tags: Conventionele kolomchromatografie, China conventionele kolomchromatografie fabrikanten, leveranciers, fabriek
Een paar
Kleine chromatografiekolomVolgende
Klassieke kolomchromatografieAanvraag sturen
